探討紅外分光光度計(jì)的常用波長
紅外分光光度計(jì)廠家的分光光度計(jì)是利用分光光度法,通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。不同種類的分光光度計(jì)的基本原理相似,都是利用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源。光源透過測試的樣品后,部分光源被吸收,通過測量樣品的吸光值,經(jīng)過計(jì)算可以轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
紅外分光光度計(jì)常見用途和波長有哪些?
1.核酸定量
核酸的高吸收峰的吸收波長260 nm。利用260nm的波長可以定量測量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA的濃度。
除了核酸濃度,分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度。如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。
A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品,A320一般是0。
2.蛋白質(zhì)直接定量
這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg公式,光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應(yīng)的換算方法,將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。
3.細(xì)菌細(xì)胞密度
細(xì)菌培養(yǎng)過程中,需要采用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測定細(xì)菌細(xì)胞密度。
追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法在600nm波長下,以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液,測量定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。